Буферы для вестерн-блоттинга — правильно подбирайте зонды для вестерн-блоттинга для получения чет...

Узнайте, как проводить анализ вестерн-блота с использованием оптимизированных буферов и методов инкубации антител: https://www.thermofisher.com/us/en/ho...

Смотрите больше:    • Western Blot Fundamentals  

Что вы узнаете:
• Как подготовить мембраны для анализа
• Как инкубировать первичные и вторичные антитела
• Лучшие практики блокирования и этапы промывки
• Как уменьшить фоновый шум и улучшить четкость сигнала
• Советы для получения стабильных и воспроизводимых результатов вестерн-блоттинга

Используемые материалы:
• Мембрана для вестерн-блоттинга (PVDF или нитроцеллюлоза)
• Блокирующий буфер
• Первичное антитело
• Вторичное антитело
• Буфер для промывки вестерн-блоттинга (например, TBST)
• Инкубационные лотки или контейнеры
• Шейкер или шейкер

Описанные этапы:
• Блокирование мембраны для предотвращения неспецифического связывания.

• Инкубация с первичным антителом в рекомендуемых условиях.

• Промывка для удаления несвязанного первичного антитела.

• Инкубация со вторичным антителом.

• Выполнение заключительной промывки для уменьшения фонового шума.

• Подготовка блота к детекции.

РАЗДЕЛЫ:
00:00 – Обзор метода вестерн-блоттинга
00:28 – Блокирование мембраны
01:05 – Инкубация с первичными антителами
01:55 – Этапы промывки
02:35 – Инкубация со вторичными антителами
03:15 – Заключительная промывка и подготовка к детекции

Часто задаваемые вопросы
В: Как долго следует блокировать мембрану перед зондированием?
Время блокирования варьируется в зависимости от буфера и типа мембраны, но обычно составляет 30–60 минут.

В: Что вызывает высокий фоновый уровень во время зондирования?
Недостаточное промывание, переконцентрация антител или плохое блокирование могут увеличить фоновый уровень.

В: Можно ли использовать этот рабочий процесс с флуоресцентной или хемилюминесцентной детекцией?

Да, правильное зондирование имеет решающее значение для обоих методов детекции.

#ВестернБлот #Блотирование #ДетекцияБелков #БуферыДляВестернБлотинга #БиологияБелков #ThermoFisher #ЛабораторныеТехники