De l'oignon à son ADN, extraction, coloration in situ Syber Dapi, électrophorèse Gel et Syber Green

TP sur l'ADN réalisable en 2h ou en deux séances de 1h30 avec des élèves de classe de Seconde

1 - Coloration ADN oignon in situ avec colorants de l'ADN :

Peu spécifiques de l'ADN et de l'ARN (Lycée de l'Elorn) : vert de méthyle acétique (ADN) et vert de méthyle pyronine (ADN et ARN).

Spécifique de l'ADN à la Station Biologique de Roscoff : intercalants spécifiques de l'ADN se liant au petit sillon de l'ADN mais perméants des membranes cellulaires donc mutagènes et cancérogènes interdits de manipulation avec les élèves : Syber Grenn et DAPI dans le laboratoire de Guillaume BOUYER, ingénieur de recherche.

2 - Extraction ADN oignon et obtention d'une méduse d'ADN et d'ARN d'oignon.

3 - Coloration de la méduse d'ADN et d'ARN d'oignon au gel Green au labo des SVT du Lycée de l'Elorn et lecture au transilluminateur sous lumière bleue.

4 - Électrophorèse de d'ADN et d'ARN d'oignon sur gel d'agarose coloré au Gel Grenn (Lycée de l'Elorn) vs coloré au Syber Green dans le laboratoire de Laurent PERES, assistant ingénieur à la Station Biologique de Roscoff.

5 - Visualisation de l'électrophorèse d'ADN au maximum d’excitation du fluorophore (Gel Grenn ou Syber Green) par l'émission d'une fluorescence spécifique émise par le complexe fluorophore - ADN.

Hervé KEMPF, Enseignant des S.V.T. et coordonnateur des S.V.T. au lycée de l'Elorn de Landerneau, Finistère.