Séquençage de Sanger | Biochimie Facile

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Dans cette vidéo, nous explorons le séquençage de Sanger, une méthode clé pour décoder la séquence de l'ADN. Créée en 1977 par Frederick Sanger et son équipe, cette technique est fondamentale en génétique.

Le processus commence par une PCR à terminaison de chaîne, où l'ADN cible est amplifié. Dans cette version particulière de la PCR, des didésoxynucléotides (ddNTP) radiomarqués sont ajoutés, ce qui provoque l'arrêt aléatoire de la réaction d'élongation, marquant ainsi les fragments d'ADN générés.

Quatre réactions de PCR sont effectuées, chacune avec un type de ddNTP. Les fragments résultants sont ensuite séparés par électrophorèse en fonction de leur taille.

Enfin, l'analyse du gel révèle la séquence d'ADN. Chaque puits correspond à un ddNTP spécifique, et la lecture se fait du bas vers le haut du gel. Par exemple, si le premier fragment marqué est un ddGTP, cela signifie que le premier nucléotide de la séquence est un G.

Nous avons également abordé le séquençage de Sanger automatisé, où des fluorophores sont utilisés à la place des radiomarquages. Cette méthode moderne permet de déterminer la séquence d'ADN de manière plus efficace et précise.

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